標題：Net decrease in spine-surface GluA1-containing AMPA receptors after post-learning sleep in the adult mouse cortex
譯名：在學習后睡眠可使成年小鼠皮質后含有脊柱表面Glua1的含量減少。
作者：Miyamoto, D.等
時間：2021-05-17
期刊：Nature communications
影響因子：14.9
DOI：10.1038/s41467-021-23156-2
摘要：睡眠有益于學習和記憶的機制尚不清楚。睡眠可以進一步加強通過學習增強的突觸，或促進廣義突觸減弱，同時保護新增強的突觸。我們通過結合鞏固與睡眠依賴的運動任務，突觸AMPA受體可塑性的標志物以及重復的雙光子成像來測試這些想法，以跟蹤體內具有單脊柱分辨率的數百根脊柱。在小鼠運動皮層中，睡眠導致在學習之前和之后，脊柱表面含有GluA1的AMPA受體的整體凈減少。學習后睡眠期間單棘的分子變化與睡眠后表現的變化相關。與睡眠剝奪相比，學習導致GluA1表達最大增加的棘刺在學習后睡眠后具有相對優勢，因為睡眠會削弱所有剩余的脊柱。這些結果在成年小鼠中獲得，表明睡眠依賴性突觸向下選擇也有利于大腦的成熟。
推薦語: 學習和誘導的增強與AMPA受體的數量和活性的持續增加有關。實現該過程的一個關鍵步驟是在突觸后膜中摻入含GluA1的AMPA受體，本文中正是使用BEX CUY21進行小鼠胚胎的子宮電穿孔（E=14.5）以進行后續成像觀察。
標題：Creation of CRISPR-based germline-genome-engineered mice without ex vivo handling of zygotes by i-GONAD
譯名：無需離體處理受精卵通過i-GONAD創建基于CRISPR的基因組工程小鼠
作者：Gurumurthy Channabasavaiah B.等
時間：2019-07-24
期刊：Nature protocols
影響因子：13.4
DOI：10.1038/s41596-019-0187-x
摘要：創建基因工程小鼠的方法涉及三個主要步驟：從雌鼠中收獲胚胎，將試劑顯微注射到離體胚胎中，并將其手術轉移到另一組雌鼠。三十多年來一直使用這些方法該創建小鼠模型。我們最近開發了一種名為GONAD（通過輸卵管核酸遞送進行基因組編輯）的方法，該方法繞過了這些步驟。在小鼠受孕后1.5 d將CRISPR組分（Cas9 mRNA和引導RNA（gRNA））注射到懷孕女性的輸卵管中，然后進行體內電穿孔以將組分原位遞送到受精卵中。使用GONAD，我們證明了靶基因可以在小鼠胚胎發育的不同階段進行編輯。隨后，我們通過遞送CRISPR核糖核蛋白（RNPs;Cas9蛋白或Cpf1蛋白和gRNA）進入孕0.7天小鼠體內，這使得它適用于生成常規敲除和大缺失小鼠模型。當提供單鏈DNA（ssDNA）修復模板時，i-GONAD還可以生成包含高達1kb插入片段的敲入模型。i-GONAD還有其他優點：它不需要輸精管切除術的雄性和假孕雌性，用于i-GONAD的雌性不會被犧牲，可用于其他實驗，它可以很容易地在缺乏復雜顯微注射設備的實驗室中采用，并且可以由熟練的小動物手術但缺乏胚胎處理技能的研究人員實施。文中我們提供了用于建立i-GONAD的方法。
推薦語: CRISPR動物基因組工程廣泛應用于研究中，該方法包括三個主要步驟：受精卵的分離，顯微注射，以及將顯微注射的受精卵轉移到假懷孕雌性的輸卵管中。GONAD技術使用CUY21直接輸卵管上對受精卵進行原位電穿孔，生產基因組編輯小鼠，成功簡化了CRISPR動物基因組工程的三大步驟。CUY21獨特的恒流技術更是進一步保證實驗的重復性及成功率。
